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Como extrair polissacarídeos de Ganoderma Lucidum?

Data: 2019-11-11


Ganoderma lucidum na taxonomia pertence ao Aphyllopho rales Ganodermataceae Ganoderma. Estudos farmacológicos e clínicos antigos e modernos provaram que Ganoderma lucidum tem o efeito de prevenir e curar doenças e prolongar a vida. O polissacarídeo de Ganoderma lucidum possui atividade pseudo-SOD significativa, que pode remover significativamente os radicais livres gerados pelo organismo, impedir danos aos radicais livres no corpo, impedir a peroxidação lipídica, proteger as células e retardar o envelhecimento celular. Ele pode melhorar o tumor de imunossupressão do corpo e aumentar a capacidade do corpo de resistir à hipóxia. Ele regula o açúcar no sangue e os lipídios no sangue, protege o fígado, previne a radiação e eleva os glóbulos brancos, anti-herpes vírus, anti-mutação, anti-úlcera, etc. em.
Existem muitos métodos para determinar o conteúdo de polissacarídeos, como espectrofotometria UV visível e titulação. Atualmente, mais relatórios estão disponíveis no espectrofotômetro UV. O método utiliza principalmente o princípio de que o polissacarídeo reage com alguns reagentes para determinar a relação linear entre a absorbância e o conteúdo. De acordo com os diferentes agentes de revelação de cores, ele pode ser dividido no método do ácido fenol sulfúrico, método do antrone sulfúrico, salicílico método ácido, etc. Liu Yanping usou o espectrofotômetro 722 para medir a absorbância a 625 nm por agentes de revelação de cor do ácido sulfúrico antrônico. O conteúdo de polissacarídeos de Ganoderma lucidum em Ganoderma lucidum cultivado por diferentes cepas foi determinado e o pigmento foi removido por adsorção de carvão ativado e o oligossacarídeo removido por 85% etanol eliminou basicamente a interferência. Mao Weilun et al. utilizou um espectrofotômetro 751-GW e um espectrofotômetro DV-6l0 para desenvolver cores com uma solução de sulfato de antrona. Determinação de polissacarídeos de Ganoderma lucidum em cápsulas de Ganoderma lucidum por determinação da absorbância a 625 nm e refluxou duas vezes com ácido acético 80%, remova o oligossacarídeo e remova a perturbação. Shi Juan et al. usaram o espectrofotômetro UV-260 e o espectrofotômetro UV-visível visível 752 para determinar o conteúdo dos polissacarídeos de Ganoderma lucidum no 488.7nm por colorimetria com ácido sulfúrico fenol. Zheng Xiukui et al. determinou o conteúdo de polissacarídeos de Ganoderma lucidum nas cápsulas de Ganoderma lucidum a 520 nm com suco espectrofotométrico UV-2100 e colorimetria com ácido 3,5-dinitrosalicílico. Zheng Xuezhen et al. mediu o conteúdo de polissacarídeos por suco espectrofotométrico visível por UV-2l0O UV e espectrofotometria 75lG. É relatado que o método de enxofre com antrona existe desvantagens, como grandes flutuações nos dados e baixa repetibilidade. Se as condições de determinação no método do ácido fenol sulfúrico puderem ser estudadas em detalhes e encontrar as melhores condições, a precisão e a repetibilidade do método poderão ser melhoradas. Para atingir o objetivo de determinação rápida e precisa do conteúdo de polissacarídeos de Ganoderma lucidum, o autor estudou as condições de determinação do polissacarídeo de Ganoderma lucidum pelo método do ácido fenol sulfúrico e fez os dados do conteúdo do polissacarídeo de Ganoderma lucidum determinados pelo método do ácido fenólico sulfúrico modificado mais estável e preciso.


1. materiais e métodos

Material experimental 1.1
O teste Ganoderma lucidum foi fornecido pelo Instituto de Pesquisa de Fungos Comestíveis da Universidade Agrícola de Hunan; o espectrofotômetro ultravioleta UV-3310 da Hitachi; os reagentes como fenol, ácido sulfúrico e etanol absoluto foram fornecidos pelo Instituto Nacional da China para o Controle de Produtos Farmacêuticos e Biológicos.

Preparação do Reagente 1.2
Solução de fenol 5%: pesar 50 g de fenol (AR), adicionar 100 ml de água destilada para dissolver e preparar um licor-mãe. Solução de fenol% 50, tome 10 ml de solução fenol% 50, adicione água destilada a 100 ml e prepare uma solução fenol% 5, que já está pronta para uso.

Preparação da solução de referência: Pesar no 105 ℃ seco até a glicose anidra constante, adicionar água para formar uma solução 1 mg / ml, depois pesar a parte 5 ml e 10 ml, colocar em um balão volumétrico 100 ml, diluir com água até a escala e agite para obter a solução de glicemia 0.05 mg / ml e 0.10 mg / ml.

1.3 Extração de polissacarídeos
Pesar com precisão o pó de Ganoderma lucidum 2 g, colocado no extrator Soxhlet, adicionar água 90ml, refluxo aquecido por 6 h; combine o extrato e transfira para um balão volumétrico 100 ml, dilua até a marca com água, agite bem, meça com precisão 10 ml, adicione 150 ml de etanol, agite bem e coloque a 4 ° C por 12 h, remova, centrifugue o sobrenadante o fluido é decantado, dissolve o precipitado com água e transfere para um balão volumétrico 50 ml, agita-se bem até o volume, ou seja, a solução da amostra é reservada.


2. Determinação das condições de teste

2.1 Seleção do comprimento de onda máximo de absorção
A solução de referência de glicose anidra e a solução de teste de Ganoderma lucidum obtida pelo ácido fenol sulfúrico foram respectivamente coletadas e digitalizadas de 400 a 700 nm para determinar o comprimento de onda de absorção máximo. Os resultados mostram que ambos têm absorção máxima em 490 nm.

2.2 Seleção da quantidade de adição de fenol
Pegue a solução de glicose 0.05 mg / ml e a amostra de teste de Ganoderma lucidum 1.0 ml coloque as peças 6 em tubos de ensaio com tampa 15 ml, adicione solução de fenol% 5% 1.0, 2.0, 3.0, 4.0, 5.0, 6.0 ml, agite bem, adicione 5.0 ml de ácido sulfúrico, dilua para 15 ml com água destilada, agite e misture rapidamente e em água fervente por 30 min. 1.0 ml de água foi adicionado com 1.0 ml de uma solução de fenol% 5 e adicionado a 5 ml de ácido sulfúrico concentrado como uma solução em branco, e a absorbância a 490 nm foi medida por espectrofotometria e a água destilada foi usada como um branco. Os resultados dos testes mostram que, quando as outras condições são constantes, o valor da absorbância não aumenta com o aumento da quantidade de 5% de fenol, e a absorvância é a maior quando a dosagem é 1.0 ml, portanto a quantidade ideal de fenol é 1 ml.

2.3 Seleção da quantidade de adição de ácido sulfúrico
Pegue a solução de glicose 0.05 mg / ml e a amostra de teste de Ganoderma lucidum 1.0 ml cada uma para as peças 8, coloque-as em tubos de ensaio com tampa 10 ml, adicione solução de fenol% 5% 1.0 ml, agite e misture, adicione 1.0, 2.0, 3.0, 4.0, 5.0, 6.0, 7.0, 8.0 ml de ácido sulfúrico, perfazer até 10 ml com água destilada, agitar e misturar rapidamente, em temperatura ambiente por 30 min, medir a absorbância em 490 nm por espectrofotometria, em branco de acordo com o item Preparação do método 2.2. Os resultados do teste mostram que a absorvância aumenta com o aumento da quantidade de solução de ácido sulfúrico sob outras condições inalteradas e a absorvância é inalterada em 5 ml. Portanto, a quantidade ideal de ácido sulfúrico é 5 ml.

2.4 Determinação do desenvolvimento da estabilidade.
Tome uma solução padrão de glicose de 0.05 mg / ml e 1.0 ml de água destilada em um tubo de ensaio rolha 10 ml, adicione 1.0 ml de uma solução padrão de fenol% 5%, misture bem e adicione rapidamente 5.0 ml de ácido sulfúrico concentrado, reagindo respectivamente durante 10,30,60,90,120,150 e 180 minutos em banho-maria a ferver, arrefecido à temperatura ambiente imediatamente após a remoção e, em seguida, a absorvância foi medida a 490 nm. O branco foi preparado de acordo com o método de 2.2. Os valores de absorvância medidos foram respectivamente 0.374, 0.394, 0.392, 0.393, 0.392, 0.391 e 0.392. Como o prolongamento do tempo é favorável à dissolução do polissacarídeo, o desenvolvimento da cor é estável dentro de uma hora 3, mas a absorbância é a maior em uma unidade 30 min. Portanto, para melhorar a eficiência da medição do conteúdo de polissacarídeos, a seleção experimental foi realizada em 30 min.

Seleção de temperatura de cor 2.5
Tome uma solução padrão de glicose de 0.05 mg / ml e 1.0 ml de água destilada em um tubo de ensaio rolha 10 ml, adicione 1.0 ml de solução padrão de fenol% 5%, misture bem e adicione rapidamente 5.0 ml de ácido sulfúrico concentrado, misture e separadamente a temperatura do local é um calor de água 25, 50, 75, 100 ° C por 30 min e esfrie imediatamente até a temperatura ambiente após a remoção, depois meça a absorvância em 490 nm. Consulte o item 2.2 para o líquido em branco, e os resultados são respectivamente 0.434, 0464, 0.535 e 0.556. Deste modo, pode-se observar que quanto mais alta a temperatura, mais o polissacarídeo é dissolvido e a absorvância é a mais alta no 100 ° C, indicando que o polissacarídeo é mais dissolvido na água fervente, de modo que a temperatura de desenvolvimento da cor é selecionada como 100 ° C.

O material de seleção e a introdução detalhada do experimento neste artigo, os amigos conheciam seu método de teste?