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¿Cómo extraer polisacáridos de Ganoderma Lucidum?

Fecha: 2019, 11, 11


Ganoderma lucidum en el taxonómico pertenece a los Aphyllopho rales Ganodermataceae Ganoderma. Estudios farmacológicos y clínicos antiguos y modernos han demostrado que Ganoderma lucidum tiene el efecto de prevenir y curar enfermedades y prolongar la vida. El polisacárido de Ganoderma lucidum tiene una actividad significativa de pseudo-SOD, que puede eliminar significativamente los radicales libres generados por el cuerpo, prevenir el daño de los radicales libres en el cuerpo, prevenir la peroxidación de lípidos, proteger las células y retrasar el envejecimiento celular. Puede mejorar el tumor de inmunosupresión del cuerpo y mejorar la capacidad del cuerpo para resistir la hipoxia 、 Regula el azúcar en la sangre y los lípidos en la sangre, protege el hígado, previene la radiación y eleva los glóbulos blancos, el virus anti herpes, la antimutaciones, las úlceras, etc. en.
Existen muchos métodos para determinar el contenido de polisacáridos, como la espectrofotometría UV visible y la valoración. Actualmente hay más informes disponibles en el espectrofotómetro UV. El método utiliza principalmente el principio de que el polisacárido reacciona con algunos reactivos para determinar la relación lineal entre la absorbancia y el contenido.De acuerdo con los diferentes agentes de desarrollo de color, se puede dividir en método de ácido fenol sulfúrico, método de ácido sulfúrico anthrone, salicílico método ácido, etc. Liu Yanping usó el espectrofotómetro 722 para medir la absorbancia a 625 nm mediante agentes de desarrollo de color del ácido sulfúrico anthrone. Se determinó el contenido de polisacárido de Ganoderma lucidum en Ganoderma lucidum cultivado por diferentes cepas, y el pigmento se eliminó por adsorción de carbón activado y el oligosacárido eliminado por etanol 85%, básicamente eliminó la interferencia. Mao Weilun y col. usó un espectrofotómetro 751-GW y un espectrofotómetro DV-6l0 para desarrollar el color con una solución de sulfato de hormona. Determinación de polisacáridos de Ganoderma lucidum en cápsulas de Ganoderma lucidum por determinación de absorbancia a 625 nm y reflujo dos veces con ácido acético 80%, eliminar el oligosacárido y eliminar la perturbación. Shi Juan y col. usó el espectrofotómetro UV-260 y el espectrofotómetro 752 UV-visible para determinar el contenido de polisacáridos de Ganoderma lucidum en 488.7nm por colorimetría de ácido fenol sulfúrico. Zheng Xiukui y col. determinó el contenido de polisacáridos de Ganoderma lucidum en cápsulas de Ganoderma lucidum a 520 nm con jugo espectrofotométrico UV-2100 y colorimetría de ácido 3,5-dinitrosalicílico. Zheng Xuezhen y col. midió el contenido de polisacárido por jugo espectrofotométrico UV-2l0O visible por UV y espectrofotometría 75lG. Se informa que el método del azufre de la hormona existe desventajas tales como grandes fluctuaciones en los datos y escasa repetibilidad. Si a través de las condiciones de determinación en el método del ácido fenol sulfúrico se puede estudiar en detalle y encontrar las mejores condiciones, se puede mejorar la precisión y la repetibilidad del método. Para lograr el propósito de la determinación rápida y precisa del contenido de polisacárido de Ganoderma lucidum, el autor estudió las condiciones de determinación del polisacárido de Ganoderma lucidum por el método de ácido fenol sulfúrico, e hizo los datos del contenido de polisacárido de Ganoderma lucidum determinado por el método de ácido fenol sulfúrico modificado más Estable y preciso.




1. materiales y métodos

Material experimental 1.1
La prueba Ganoderma lucidum fue proporcionada por el Instituto de Investigación de Hongos Comestibles de la Universidad Agrícola de Hunan; el espectrofotómetro ultravioleta UV-3310 de Hitachi; Los reactivos como fenol, ácido sulfúrico y etanol absoluto fueron provistos por el Instituto Nacional de China para el Control de Productos Farmacéuticos y Biológicos.

Preparación del reactivo 1.2
Solución de 5% fenol: Pese 50 g de fenol (AR), agregue 100 ml de agua destilada para disolver y prepare un licor madre. Solución de fenol 50%, tome 10 ml de solución de fenol 50%, agregue agua destilada a 100 ml y prepare una solución de fenol 5%, que ahora está lista para usar.

Preparación de la solución de referencia: Pesar a 105 ℃ secado a la glucosa anhidra constante, agregar agua para hacer una solución 1 mg / ml, luego pesar 5 ml y 10 ml, colocar en un matraz volumétrico 100 ml, diluir con agua para escalar y agite para obtener 0.05 mg / ml y solución de glucosa 0.10 mg / ml.

1.3 Extracción de polisacáridos
Pesaje de precisión Ganoderma lucidum en polvo 2 g, colocado en el extractor Soxhlet, agregue agua 90ml, reflujo calentado durante 6 h; combine el extracto y transfiéralo a un matraz volumétrico de 100 ml, diluya hasta la marca con agua, agite bien, mida con precisión 10 ml, agregue 150 ml de etanol, agite bien, coloque a 4 ° C para 12 h, retire, centrifugue, el sobrenadante se decanta el líquido, se disuelve el precipitado con agua y se transfiere a un matraz volumétrico de 50 ml, se agita bien al volumen, es decir, se reserva la solución de muestra.



2 Determinación de las condiciones de prueba.

2.1 Selección de longitud de onda de absorción máxima
La solución de referencia de glucosa anhidra y la solución de prueba de Ganoderma lucidum obtenida por ácido fenol sulfúrico se tomaron y exploraron respectivamente a 400 a 700 nm para determinar la longitud de onda de absorción máxima. Los resultados muestran que ambos tienen una absorción máxima a 490 nm.

2.2 Selección de la cantidad de adición de fenol
Tome 0.05 mg / ml de solución de glucosa y la muestra de prueba de Ganoderma lucidum 1.0 ml cada una de las partes de 6 en tubos de ensayo tapados con 15 ml, agregue respectivamente 5% solución de fenol 1.0, 2.0, 3.0, 4.0, 5.0, 6.0 ml, agite bien, agregue 5.0 ml de ácido sulfúrico, diluir a 15 ml con agua destilada, agitar y mezclar rápidamente y en agua hirviendo durante 30 min. Se añadió 1.0 ml de agua con 1.0 ml de una solución de fenol al 5%, y se añadió a 5 ml de ácido sulfúrico concentrado como una solución en blanco, y se midió la absorbancia a 490 nm por espectrofotometría, y se usó agua destilada como un blanco. Los resultados de la prueba muestran que, cuando las otras condiciones son constantes, el valor de absorbancia no aumenta con el aumento de la cantidad de 5% fenol, y la absorbancia es mayor cuando la dosis es 1.0 ml, por lo que la cantidad óptima de fenol es 1 ml.

Selección 2.3 de la cantidad de adición de ácido sulfúrico
Tome 0.05 mg / ml de solución de glucosa y la muestra de prueba de Ganoderma lucidum 1.0 ml cada una para las partes de 8, colóquelas en tubos de ensayo con tapón 10 ml, agregue 5% solución de fenol 1.0 ml, agite y mezcle, respectivamente agregue 1.0, 2.0, 3.0, 4.0, 5.0, 6.0, 7.0, 8.0 ml de ácido sulfúrico, completar hasta 10 ml con agua destilada, agitar y mezclar rápidamente, a temperatura ambiente durante 30 min, medir la absorbancia a 490 nm por espectrofotometría, en blanco según la preparación del método 2.2 del artículo. Los resultados de la prueba muestran que la absorbancia aumenta con el aumento de la cantidad de solución de ácido sulfúrico en otras condiciones sin cambios, y la absorbancia no cambia en 5 ml. Por lo tanto, la cantidad óptima de ácido sulfúrico es 5 ml.

2.4 Determinación del desarrollo de la estabilidad.
Tome una solución estándar de glucosa de 0.05 mg / ml y 1.0 ml de agua destilada en un tubo de ensayo con tapón 10 ml, agregue 1.0 ml de una solución de fenol estándar 5%, mezcle bien y agregue rápidamente 5.0 ml de ácido sulfúrico concentrado, respectivamente reaccionando durante 10,30,60,90,120,150 y 180 minutos en un baño de agua hirviendo, enfriado a temperatura ambiente inmediatamente después de la eliminación, y luego se midió la absorbancia a 490 nm. El blanco se preparó de acuerdo con el método de 2.2. Los valores de absorbancia medidos respectivamente fueron 0.374, 0.394, 0.392, 0.393, 0.392, 0.391 y 0.392. Dado que la prolongación del tiempo es favorable para la disolución del polisacárido, el desarrollo del color es estable dentro de 3 horas, pero la absorbancia es mayor en 30 min. Por lo tanto, para mejorar la eficiencia de medición del contenido de polisacárido, la selección experimental se realizó a 30 min.



2.5 Selección de temperatura de color
Tome una solución estándar de glucosa de 0.05 mg / ml y 1.0 ml de agua destilada en un tubo de ensayo con tapón 10 ml, agregue 1.0 ml de solución de fenol estándar 5%, mezcle bien y agregue rápidamente 5.0 ml de ácido sulfúrico concentrado, mezcle y separe la temperatura del lugar es un calor de agua 25, 50, 75, 100 ° C durante 30 min y se enfría inmediatamente a temperatura ambiente después de la extracción, luego mida la absorbancia a 490 nm. Consulte el ítem 2.2 para el líquido en blanco, y los resultados respectivamente son 0.434 、 0464 、 0.535 y 0.556. De esto, se puede ver que cuanto mayor es la temperatura, más se disuelve el polisacárido y la absorbancia es mayor en 100 ° C, lo que indica que el polisacárido está más disuelto en el agua hirviendo, por lo que la temperatura de desarrollo del color se selecciona para que sea 100 ° C.

El material de selección y la introducción detallada del experimento en este artículo, ¿conocían los amigos su método de prueba?